軍團(tuán)菌病在一年四季均能發(fā)生，夏秋季尤為猖獗。由于沒(méi)有有效的疫苗，軍團(tuán)菌的防治主要是阻斷其生長(zhǎng)和繁殖，水源管理與定期檢測(cè)是目前的主要手段。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織把水源中軍團(tuán)菌的檢測(cè)作為水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌學(xué)檢查的一部分，我國(guó)也出臺(tái)了標(biāo)準(zhǔn)《公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范（WS/T394-2012)》，明確要求送風(fēng)指標(biāo)中嗜肺軍團(tuán)菌不得檢出。

需注意的是，環(huán)境中的軍團(tuán)菌主要寄生在原蟲(chóng)或生物膜中，并借助空氣中的氣溶膠傳播；當(dāng)受到外界不利刺激時(shí)（如不利的營(yíng)養(yǎng)、pH、溫度、消毒劑等）其可進(jìn)入活的非可培養(yǎng)狀態(tài)（viable but non-culturable,VBNC），待條件合適時(shí)，又能恢復(fù)活力和致病性。軍團(tuán)菌的傳播性、致病性和環(huán)境隱蔽性給檢測(cè)提出了更高要求。綜合來(lái)看，要做好有效防治，軍團(tuán)菌的檢測(cè)需滿足①即時(shí)性，即能夠快速獲取檢測(cè)結(jié)果，做到早檢測(cè)、早治理，快速阻斷病菌傳播；②全面性，軍團(tuán)菌檢測(cè)應(yīng)盡量覆蓋其1-15血清型及潛在的VBNC（活的非可培養(yǎng)狀態(tài)）細(xì)菌；③安全性，應(yīng)最大程度保障檢測(cè)人員的安全，并能方便操作，從而擴(kuò)大檢測(cè)范圍和頻率。

目前常用的軍團(tuán)菌的檢測(cè)方法包括分離培養(yǎng)法、PCR檢測(cè)法和膠體金免疫層析法等，這些方法互有優(yōu)缺點(diǎn)，一定程度上滿足了檢測(cè)需求。本期軍團(tuán)菌專題為您帶來(lái)軍團(tuán)菌常見(jiàn)檢測(cè)方法的介紹，旨在為軍團(tuán)菌防控提供幫助。

膠體金免疫層析技術(shù)是一種將膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫檢測(cè)技術(shù)和層析分析技術(shù)等多種方法有機(jī)結(jié)合在一起的固相標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)。層析過(guò)程中免疫復(fù)合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域(檢測(cè)帶),運(yùn)用可目測(cè)的標(biāo)記物(膠體金)而得到直觀的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象(顯色)。

膠體金免疫層析技術(shù)近年來(lái)實(shí)現(xiàn)了快速迭代升級(jí)，目前可以便捷、快速、準(zhǔn)確和無(wú)污染地進(jìn)行檢測(cè)操作，同時(shí)有能力檢測(cè)VBNC（活的非可培養(yǎng)）細(xì)菌。因此膠體金試紙成為目前進(jìn)行軍團(tuán)菌快速檢測(cè)的主要方法之一。

分離培養(yǎng)法是軍團(tuán)菌檢測(cè)的傳統(tǒng)方法，以細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖并目視觀察到菌落形成等為基礎(chǔ)。由于軍團(tuán)菌營(yíng)養(yǎng)要求特殊，檢測(cè)周期長(zhǎng)，需要時(shí)間為3~5天，最長(zhǎng)可達(dá)到14天。

分離培養(yǎng)法是目前軍團(tuán)菌活菌檢測(cè)最常用的方法，被認(rèn)為是檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但該方法存在回收率低（回收率僅>64%）的問(wèn)題，且在雜菌嚴(yán)重或細(xì)菌處于VBNC狀態(tài)時(shí)難以應(yīng)用，檢測(cè)所需時(shí)間長(zhǎng)，不能滿足快速檢測(cè)的要求。

酶底物法是一種以細(xì)菌酶檢測(cè)技術(shù)為基礎(chǔ)，基于最可能數(shù)（most probable number, MPN）方法的定量檢測(cè)方法。嗜肺軍團(tuán)菌利用酶底物試劑中豐富的氨基酸、維生素和其他營(yíng)養(yǎng)成分迅速生長(zhǎng)繁殖，同時(shí)會(huì)利用額外添加的酶底物反應(yīng)生成一種棕色的指示物使溶液顯褐色或者渾濁。

酶底物法可以單次檢測(cè)多個(gè)樣本，并能檢測(cè)到非常低濃度的待測(cè)物質(zhì)，可以選擇特定的底物和酶，從而提高其特異性。但正是由于酶底物法的適用范圍受底物和酶的限制，因此在某些情況下無(wú)法適用，受干擾影響大。

酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種常用的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，用于檢測(cè)樣本中特定抗體或抗原的存在。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。ELISA可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺來(lái)進(jìn)行定性或定量分析。

由于酶的催化頻率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。但酶聯(lián)免疫吸附法本身并不能直接確定產(chǎn)生反應(yīng)的是哪種細(xì)菌，無(wú)法對(duì)這些成分做出鑒定。同時(shí)，ELISA作為一種實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，在水體軍團(tuán)菌檢測(cè)中通常需要在合格的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下由專業(yè)的檢測(cè)人員進(jìn)行操作，以確保結(jié)果的可靠性。

PCR檢測(cè)法是基于膜完整性進(jìn)行的檢測(cè)。活細(xì)胞由于具有完整的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，可以將DNA的一些特異經(jīng)膜的結(jié)合染料排除在外，而死細(xì)胞和膜損傷細(xì)胞則無(wú)法組織染料的進(jìn)入。EMA-PCR法檢測(cè)快速，可特異性區(qū)分死菌與活菌，與熒光定量PCR結(jié)合還可進(jìn)行定量檢測(cè)。

PCR法是一種快速、敏感且可靠的檢測(cè)方法。但相比傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法，PCR法的設(shè)備和試劑成本較高，檢測(cè)過(guò)程對(duì)操作人員的專業(yè)知識(shí)有較高要求。且由于PCR法對(duì)DNA非常敏感，并不能區(qū)分死菌與活菌，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

免疫熒光細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物，再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。再利用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光反應(yīng)(黃綠色或桔紅色)，最終利用定量技術(shù)（比如流式細(xì)胞儀）測(cè)定含量。

免疫熒光法檢測(cè)靈敏，操作簡(jiǎn)便，過(guò)程安全，但該技術(shù)對(duì)樣本的處理和固定要求較高，同時(shí)要求檢測(cè)單位有相關(guān)儀器設(shè)備。 

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